Jueves, 24 de julio de 2014
PCR

Autor: Morales Montero,Fernando

La Distrofia Miotónica es una enfermedad multisistémica de herencia autosómica dominante. El defecto molecular es una expansión del trinucleótido CTG presente en la región 3' no codificante (3´UTR) del gen DMPK, localizado en el cromosoma 19q13.3. El objetivo del estudio fue implementar el diagnóstico molecular de la Dm con el fin de contribuir a mejorar el manejo clínico de los pacientes afectados y a que el consejo genético sea más certero y preciso. El estudio se realizó en pacientes con diagnóstico mediante el uso de técnicas molecular, a saber, la hidridación de Southern y la PCR. Se obtuvo el diagnóstico molecular de 84 pacientes de 21 diferentes familias; en 34 se diagnosticó el defecto molecular. En 21 personas de familias donde se comprobó que segrega la mutación, el gen resultó normal. En 29 pacientes de ocho familias no se encontró la mutación. Se observó una correlación positiva entre la severidad de la enfermedad y el número de repeticiones CTG. Aquellos casos que resultaron negativos probablemente sean pacientes con mutaciones en otros genes, ya sea PROMM/DM2 u otras miotonias hereditarias. El diagnóstico molecular debe usarse como herramienta para logra la clasificación clínica de los pacientes. El abordaje correcto de la enfermedad, debido a que todavía no existe tratamiento, debe incluir, además del manejo clínico interdisciplinario, la prevención mediante el consejo genético basado en el diagnóstico molecular preciso de la condición de portador o portadora.

Autor: García-Cañas, Virginia

We review the combined use of molecular techniques and capillary electrophoresis (CE) in food analysis. We present an up-to-date overview (including works published up to January 2004) and discuss the advantages and the drawbacks of these combined techniques. The main applications of molecular techniques in conjunction with CE in food analysis include: (i) species identification; (ii) microbiological and toxicological analysis; and (iii) detection of transgenic foods. We also outline the future outlook for this analytical methodology in food science.

Autor: BARRA G,XIMENA

Introducción: El síndrome febril sin foco (SFSF) es una patología frecuente en niños, su principal causa son infecciones virales. La identificación de los pacientes que requieren antibióticos, sigue siendo un tema de debate. Objetivo: Evaluar parámetros clínicos y de laboratorio y su utilidad para la decisión de indicación de antibiótico en niños de 6 semanas a 3 años que consultan al servicio de urgencia y su diagnóstico es un SFSF con sospecha de infección bacteriana. Pacientes y Métodos: Estudio descriptivo prospectivo realizado en 640 pacientes entre 6 semanas y 36 meses de edad, hospitalizados o derivados a infectología desde la urgencia del Hospital Dr. Sótero del Río, en quienes se sospechó IBI, durante los años 2005 a 2007. Resultados: Se confirmó IBI en 53,7% de los pacientes, siendo la localización más frecuente la vía urinaria (80,17%), bacteriemia (9%) y neumonía (8,75%). Hubo diferencia estadísticamente significativa entre el promedio de PCR, RAN y leucocitos entre los pacientes con IBI confirmadas y el resto, sin embargo, en las curvas de ROC estas diferencias no son relevantes. Conclusión: En los pacientes con SFSF y sospecha de IBI la principal causa es la ITU. No fue posible determinar un punto de corte de PCR, RAN o leucocitos para este grupo de pacientes, pues la curva de ROC no resultó significativa

Autor: Martínez Ibeas, Ana

The aim of this study was to develop and validate a multiplex PCR technique using mitochondrial DNA (mtDNA) for the accurate and early detection of F. hepatica and C. daubneyi in G. truncatula, the mollusc intermediate host of both parasites...

Autor: Lanuza García,A

Objetivo: La hiperplasia linfoide (HL) es una proliferación benigna e hipercelular, rica en linfocitos, que morfológicamente puede simular un linfoma. Su incidencia ha disminuido debido a la sofisticación de las técnicas diagnósticas y mejor conocimiento de los linfomas. Se presenta entre la 4.ª y 6.ª década de la vida y no está determinado un manejo apropiado, objetivo de nuestro trabajo. Método: Se ha estudiado tres pacientes con alteración linfoproliferativa de anexos oculares en los que se aplicó las técnicas de histología, inmunohistoquímica y biología molecular y cuyo diagnostico definitivo se realizó gracias a la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Resultados: Las tres muestras fueron diagnosticadas por histología de HL, con las técnicas inmunohistoquímicas el resultado fue de una inflamación orbitaria idiopática y las otras dos restantes de HL. La PCR diagnosticó un linfoma no-Hodgkiniano tipo B y la otra muestra confirmó una HL. Conclusión: Hoy en día las técnicas de biología molecular son las que permiten definir que es un linfoma, en algunos casos sólo la histología y la inmunohistoquímica pueden inducir a error. Las HL de los anexos pueden suponer un estado inicial de la enfermedad. El hallazgo de una hiperplasia presumiblemente benigna en dicha localización debe hacer sospechar un posible linfoma. El diagnóstico de linfoma está en continuo cambio debido a la sofisticación de las técnicas diagnósticas. Por tanto el diagnóstico de una HL inicialmente benigna, obliga a realizar una exploración sistémica y a un seguimiento de los pacientes estrecho y muy minucioso.

Autor: Guastadisegni,Sabina

Se estudió mediante la técnica de Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) la presencia de enterovirus en el efluente final de un sistema de lagunas de estabilización para tratamiento de agua que va a ser empleada en irrigación de plantas ornamentales y árboles frutales. Los resultados obtenidos demostraron presencia de enterovirus en 11 de las 20 muestras procesadas. Estos resultados plantean la necesidad de la evaluación constante del funcionamiento de estos sistemas con el fin de garantizar la calidad del agua.

Autor: Santamaría,Erika

Introducción. En leishmaniasis se acepta que la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha simplificado el proceso de incriminación vectorial. Sin embargo, pocas veces se ha determinado la sensibilidad y la especificidad de cada PCR en la detección y la identificación del parásito en los flebótomos. Objetivo. Evaluar la aplicabilidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), basada en los iniciadores B1 y B2, en la detección e identificación de parásitos de Leishmania (Viannia) en insectos vectores enteros sin disecar. Metodología. Se determinó la sensibilidad y la especificidad de la PCR empleando diluciones de cultivo de parásitos de Leishmania spp. Se estableció el número máximo de hembras de Lutzomyia que pueden ser procesadas a la vez sin disminuir la sensibilidad de la PCR, procesando el ADN de grupos de una a cinco hembras de Lutzomyia en presencia del ADN de las diluciones de cultivo de parásitos. Además, se comparó en grupos de flebótomos infectados experimentalmente, la sensibilidad de esta PCR en la detección de infección por Leishmania (Viannia) frente al método de búsqueda de flagelados por disección del insecto y examen microscópico. Resultados. La PCR detectó desde un parásito de Leishmania (Viannia) y permitió el procesamiento de hasta tres insectos enteros sin alterar la sensibilidad. Los porcentajes de infección experimental detectados con las dos técnicas fueron similares, 33,3% con la PCR y 30% con el examen microscópico. Además, se confirmó que los iniciadores B1 y B2 son específicos para especies del subgénero Leishmania (Viannia). Conclusión. Los resultados obtenidos demuestran la sensibilidad y la especificidad de esta PCR y permiten recomendar su uso en la determinación de infección natural con parásitos de Leishmania (Viannia) en poblaciones silvestres de flebótomos.

Autor: Espinoza,Milagros

Estudios han comprobado que concentraciones elevadas de colesterol total a expensas del colesterol LDL y marcadores de inflamación, se relacionan con ateroesclerosis subclínica. El objetivo del estudio fue determinar la asociación de los niveles séricos de la proteína C reactiva ultrasensible (PCRus) con la medida del grosor de la íntima media carotídea (GIMCa) en pacientes hipercolesterolémicos. La investigación fue descriptiva, transversal e incluyó 100 pacientes divididos en grupo control (normocolesterolémico) y grupo estudio (hipercolesterolémico). No se observaron diferencias en edad y distribución por género entre los grupos. El índice de masa corporal, circunferencia abdominal, colesterol total y sus fracciones, GIMCa y PCRus se encontraron significativamente elevados en el grupo estudio. Sólo en el grupo hipercolesterolémico, el GIMCa se asoció significativamente con la PCRus. En el grupo estudio, el GIMCa promedio se elevó a través de los cuartiles de PCRus, adquiriendo su máximo valor en el cuarto cuartil. El análisis de regresión lineal múltiple identificó al colesterol unido a la LDLc y a la PCRus como predictores del GIMCa sólo en el grupo estudio. La evidencia encontrada apoya otros datos que apuntan a que no sólo el colesterol unido a la LDL sino también la PCRus podría ser un importante factor de cambios ateroscleróticos tempranos en la arteria carótida de pacientes con hipercolesterolemia aislada.

Autor: Morales Loredo,Alberto

En México, la tuberculosis (TB) es motivo de regionalización del país de acuerdo a la prevalencia, por tal motivo, la comercialización y/o exportación de bovinos, así como su movilización, es restringida. El diagnóstico oficial de la TB en bovinos en campo se realiza con la prueba de tuberculina, y posmorten con histopatología y/o por aislamiento del agente etiológico. Aunque la prueba de la tuberculina tiene baja especificidad, es suficiente para enviar animales reactores a sacrificio, lo que no garantiza que el animal esté infectado. Lo anterior, hace patente la necesidad de métodos más sensibles y específicos. En la presente investigación se analizaron muestras de exudado nasal de bovinos, para detectar microorganismos del complejo Mycobacterium tuberculosis mediante la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Todos los animales positivos a la tuberculina se consideraron como animales infectados y éstos fueron comparados con los positivos a PCR. Se muestrearon 420 animales provenientes de zonas de alta y baja prevalencia. El ADN de los exudados nasales se obtuvo con el método de extracción bromuro de cetiltrimetilamonio, y éste se utilizó en una PCR anidada para amplificar dos fragmentos (583 pb y 200 pb) de la secuencia IS6110 del complejo M. tuberculosis. La prueba de PCR logró detectar un mayor número de muestras positivas en las zonas de alta prevalencia (57%), comparada con las zonas de baja prevalencia (20%). La sensibilidad de la prueba de PCR fue del 90,5% y la especificidad del 58,3%, comparada con la prueba de tuberculina. Quedó demostrado que la prueba de PCR en secreciones nasales puede utilizarse en situaciones de compra-venta o en exposiciones ganaderas como un análisis de tamizaje para prevenir el contagio y la introducción de la enfermedad a rebaños sanos.

Autor: González,María C

El análisis de polimorfismo en la conformación de cadenas sencillas (SSCP, por sus siglas en inglés) se utilizó para caracterizar regiones del genoma de tres cepas de virus de encefalitis equina del este (VEEE), aisladas de cerebros de equinos muertos. Los segmentos de ARN fueron amplificados mediante la transcriptasa reversa acoplada a la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Se analizó un fragmento de 542 pb de la región 3’no traducible del ARNm 26S y un fragmento de 532 pb del gen de la proteína no estructural P4 (nsP4), encontrándose que la migración de las cadenas sencillas de estos fragmentos de ADNc fueron diferentes en estos aislados virales, lo que indica que presentan polimorfismo genético en estas regiones del genoma, el cual es característico de cepas de VEEE, variantes Sur Americanas.

Autor: Vanegas L,María

Objetivo. Caracterizar cepas de Staphylococcus aureus enterotoxigénicos provenientes de quesos distribuidos en supermercados, tiendas y en ventas callejeras en la ciudad de Bogotá, Colombia. Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de quesos provenientes de tiendas, supermercados y ventas callejeras. Se detectó la presencia del gen para enterotoxina A usando un set de primers reportado en estudios previos. Un total de 50 quesos fueron analizados, 13 comercializados en tiendas y en ventas callejeras y 37 en supermercados. Resultados. De las trece muestras de quesos de tiendas y ventas callejeras se aisló Staphylococcus aureus. No hubo presencia de Staphylococcus spp en muestras de quesos de supermercados (n=37). Todos los aislamientos amplificaron para toxina A. Conclusión. Existen diferencias en la calidad de los quesos según sean distribuidos en tiendas de mercado, plazas, ventas callejeras o distribuidos por supermercados, con una alta frecuencia de Staphylococcus aureus coagulasa positivo y productor de toxina A en quesos distribuidos en tiendas y en ventas callejeras.

Autor: Mercado-Blanco, Jesús

An increasing incidence and distribution of verticillium wilt has occurred in the last few years in newly established
olive orchards in southern Spain. This spread of the disease may result from use of Verticillium dahliae-infected
planting material. The early in planta detection of the pathogen would aid the implementation of certification
schemes for pathogen-free planting material. In this work, a nested polymerase chain reaction (PCR) method was
developed for the in planta detection of the nondefoliating (ND) V. dahliae pathotype, aimed especially at nurseryproduced
olive plants. For this purpose, specific primers were designed from the sequence of a 1958-bp random
amplified polymorphic DNA (RAPD) marker of ND V. dahliae, and a procedure for the extraction of PCR-quality
total genomic DNA from infected root and stem tissues of young olive plants was tested and further optimized.
Nested PCR assays detected ND V. dahliae in 4- to 14-month-old artificially infected plants of three olive cultivars.
The ND-specific PCR product was not amplified from total genomic DNA extracted from olive plants infected with
the defoliating V. dahliae pathotype. Detection of the ND pathotype was effective from the very earliest moments
following artificial inoculation of olive plants with a V. dahliae conidial suspension. Also, detection was achieved in
inoculated, though symptomless, olive plants as well as in plants that were symptomatic but became symptomless by
217 days after inoculation.

Autor: Díaz, Beatriz

El objetivo de este trabajo fue identificar las especies de hongos entomopatógenos
asociados a distintas especies de pulgones de los principales cultivos hortícolas de la
región central de la Península Ibérica
Los muestreos se realizaron en cultivos hortícolas al aire libre y en invernadero,
durante la primavera de 2006 y el otoño de 2006 y 2007. Para la identificación de las
estructuras de los hongos se realizaron preparados coloreados y montados en acetoorceina
1%. Los aislamientos se hicieron en medio Sabouraud dextrosa agar + 1% de
extracto de levadura enriquecido con yema de huevo + leche.
Los hongos identificados correspondieron al orden Entomophthorales, siendo Pandora
neoaphidis (Remaudière & Hennebert) Humber la especie predominante sobre
Macrosiphum euphorbiae (Thomas) y Nasonovia ribisnigri (Mosley) en lechuga, sobre
Aphis fabae (Scopoli) en acelga tanto en otoño como en prima vera y sobre Aphis gossypii
(Glover) en cultivos de pepino en primavera y calabacín en otoño. También se identificó
la especie Conidiobolus coronatus (Constantin) en A. fabae en individuos recogidos
en acelga durante la primavera y en M. euphorbiae en cultivos de lechuga en otoño.
Los resultados obtenidos por taxonomía clásica fueron confirmados por análisis
molecular de la región ITS, usando primers generales y específicos para P. neoaphidis.
En estas mismas muestras no se obtuvieron productos de amplificación cuando se utilizaron
primers específicos para Entomophthora planchoniana Cornu, por lo que se descartan
infecciones mixtas con estas dos especies de hongos.
Se obtuvieron sólo tres cultivos puros de P. neoaphidis a partir de A. fabae. La dificultad
de aislamiento y producción artificial del hongo sugiere que seria recomendable
desarrollar una estrategia de control de estos pulgones de hortícolas basada en Control
Biológico por Conservación.

Autor: Sánchez,Ruth Mélida

Introducción: la Chlamydia trachomatis (CT) es considerada hoy como la causa más frecuente de infecciones de transmisión sexual y enfermedad pélvica inflamatoria. Aproximadamente la mitad de los casos de infección por Chlamydia trachomatis cursan en forma asintomática lo que dificulta su detección clínica temprana y aumenta la probabilidad de secuelas a largo plazo. Objetivo: determinar la prevalencia de infección por C. trachomatis en un grupo de mujeres jóvenes con y sin leucorrea en Bogotá, Colombia. Metodología: estudio de corte transversal en el que se investigó por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa la presencia de C. trachomatis en 355 muestras de orina obtenidas de mujeres jóvenes con o sin leucorrea. Las muestras fueron recolectadas en dos instituciones de primer nivel de la Secretaría Distrital de Salud y en dos instituciones públicas de educación superior, durante los meses de junio y julio del 2004. Se investigaron variables sociodemográficas de interés y prácticas anticonceptivas. Resultados: se detectaron 19 muestras positivas, de las cuales 5 correspondían a mujeres sin leucorrea y 14 a pacientes con leucorrea. La prevalencia de infección fue 5,35% (IC 95% 3,25-8.23) en el grupo total, 2,86% (IC 95% 0,93-6,54) en las mujeres sin leucorrea y 7,78% (IC 95% 4,31-12,70) en las pacientes con leucorrea. Conclusión: la prevalencia encontrada en este estudio indica que la infección por C. trachomatis constituye un problema de interés en salud pública. Aunque la leucorrea puede considerarse como un marcador de infección por Chlamydia, dada la tendencia a mayor frecuencia en este grupo de pacientes, la prevalencia en mujeres asintomáticas fue importante y justifica ofrecer su detección en forma más amplia.

Autor: Olaya Urueña,Carlos A

Objetivo: obtener una guía para diagnóstico y manejo de la toxoplasmosis gestacional, actualizada, científicamente confiable, práctica, aplicable a Latinoamérica y que permita influir positivamente en la salud obstétrica. Materiales y metodos: se realizó una revisión de artículos elaborados en los últimos 10 años relacionados con la toxoplasmosis en el embarazo, publicados en Medline, Pub-Med, Cochrane Review y literatura científica nacional. Luego de seleccionar esta información se recopilaron los más importantes y se procedió a elaborar una guía de diagnóstico y manejo de la toxoplasmosis gestacional. Resultados: A partir de la interpretación de las curvas de comportamiento de la IgG e IgM específicas para Toxoplasma gondii, fue posible integrar una conducta médica adecuada con un determinado resultado serológico, para reducir al máximo la incorrecta interpretación de los paraclínicos, que se constituyen actualmente en la única herramienta para la detección de una enfermedad en gran parte subclínica. Conclusión: La información obtenida es reciente y con un irrefutable valor científico que permitirá abordar con más claridad esta patología, además al realizar una guía de diagnóstico y manejo será posible restarle complejidad a la interpretación de las pruebas serológicas destinadas a su detección.

Autor: Felmer D.,Ricardo

La deficiencia en la capacidad de unión de leucocitos bovinos a los antígenos, más conocida como BLAD, es una enfermedad hereditaria que resulta letal para el ganado de la raza Holstein. Su principal característica es ser una enfermedad autosómica recesiva que puede ser transmitida a la descendencia. El objetivo del trabajo fue estandarizar la metodología para realizar un diagnóstico de la enfermedad mediante técnicas moleculares y lograr una primera aproximación sobre la frecuencia génica del alelo mutado en algunas poblaciones de toros de la IX y X Región. En base a la amplificación del ADN mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR) y posterior digestión con enzimas de restricción Taq I y Hae III, fue posible visualizar, mediante electroforesis en gel de agarosa al 4%, los fragmentos de restricción característicos para bovinos normales, portadores o enfermos. La técnica se validó mediante un muestreo de 59 bovinos. De los 55 toros analizados uno resultó ser portador de BLAD, lo que implica una frecuencia génica de 1,79% en la población de toros de la IX y X Región. La técnica de PCR acoplada a la digestión con enzimas de restricción (Hae III y Taq I) ha demostrado que identifica inequívocamente el genotipo del ganado en un locus determinado y permite el diagnóstico certero y precoz de aquellos animales enfermos y/o portadores del defecto hereditario conocido como BLAD.

Autor: GOLCZER,GABRIEL

Se evaluó el rendimiento de un protocolo de acetato de potasio con modificaciones menores para la extracción del ADN genómico. Los resultados evidencian que empleando el protocolo modificado se obtuvo un ADN de mayor rendimiento (0,61, concentración de 37,34 ng/µL) respecto al protocolo original. La amplificación del ADN vía PCR para regiones mitocondriales evidencia su calidad alta ADN para estudios poblacionales a nivel molecular, en el menor tiempo y costo, sin el uso de reactivos altamente tóxicos.

Autor: López-Durán,M.

Este artículo de revisión se propone exponer las principales técnicas de biología molecular disponibles actualmente para los investigadores, en el campo del cáncer y precáncer oral, clasificadas según el tipo de material biológico del que se disponga para iniciar la investigación. Éste puede ser ADN, ARN o proteínas. La explicación de cada técnica comprenderá una breve sistemática del proceso, así como sus ventajas, inconvenientes y estado de actividad actual. Todo ello con la finalidad de esclarecer las aplicaciones, pronto indispensables, de las técnicas más destacadas, en el diagnóstico precoz, pronóstico y tratamiento individualizado del carcinoma oral. Entre las técnicas más útiles en este proceso se encuentran: la electroforesis en gel, las técnicas de hibridación, la tecnología microarray, los biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la transcriptasa inversa, las técnicas de Southern, Northern y Western blot, la secuenciación de ADN, la clonación de genes, la inmunohistoquímica, el ensayo ELISA y la citometría de flujo. Destacan en particular por su gran utilidad, la tecnología microarray, los biochips y la PCR.

Autor: Felmer,R

Se evaluó la factibilidad de aplicar una prueba de PCR para el diagnóstico y tipificación molecular del virus de la leucosis enzoótica bovina (VLB), directamente desde muestras de leche. Se analizó un total de 40 muestras de estanque predial, 33 de las cuales fueron seropositivas a una prueba de ELISA. El PCR confirmó la presencia del virus en el 100% de los estanques seropositivos, mientras que en las muestras seronegativas no se obtuvo una banda de amplificación. El posterior análisis de estas muestras mediante RFLP permitió identificar la presencia de 2 de los 3 subgrupos conocidos de variantes genéticas del virus. La aplicación de esta prueba en 10 animales de un predio permitió confirmar la presencia de más de una variante genética dentro del mismo predio, sugiriendo la probable reinfección de este predio con otras cepas del virus. Es necesario destacar que este trabajo constituye el primer reporte de la aplicación de una prueba de PCR-RFLP para la detección y tipificación del VLB directamente desde muestras de leche. De esta forma, la técnica de PCR descrita se puede utilizar no sólo como complemento al diagnóstico del VLB, sino también como una forma conveniente de realizar la tipificación del virus en una zona determinada o incluso a nivel de país, lo cual proporciona una forma rápida y conveniente de estudiar la epidemiología y distribución de la infección del VLB en nuestros rebaños.

Autor: Flórez,Mónica

Introducción. Entre los años 1998-2000 la aparición de 8 casos de leishmaniosis visceral americana en niños de un asentamiento humano de reciente establecimiento en la localidad de Guatiguará del municipio de Piedecuesta (Santander Colombia), señaló la posible presencia de un ciclo de transmisión de Leishmania en dicho lugar que motivó el presente estudio entomológico. Objetivos. Determinar frecuencia relativa en el intra y peridomicilio de Lutzomyia longipalpis y la infección natural de este vector con Leishmania spp. Materiales y métodos. Se utilizaron para el muestreo trampas CDC intra y peridomiciliares, capturas sobre cebo humano, cebo animal y en sitios de reposo, en el periodo de mayo de 1999 a septiembre del 2000. La infección natural se determinó mediante la técnica de PCR, en pooles de hembras de Lutzomyia longipalpis. Resultados. Se capturaron 7.391 flebótomos. La especie predominante fue Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), con un 99,5% de las capturas. En las recolecciones con trampas de luz CDC, L. longipalpis tuvo una mayor frecuencia en el intradomicilio que en el peridomicilio (p=0,0001). La tasa total de infección natural fue del 1,93% y se observó una correlación positiva entre los meses de mayor abundancia y el número de hembras infectadas que ingresan al domicilio. Conclusiones. Los resultados indican que en la localidad de Guatiguará Lutzomyia longipalpis, presenta tendencias marcadas hacia el intradomicilio, lo cual tiene serias implicaciones en la transmisión por cuanto el riesgo de transmisión se ve aumentado durante los meses de mayor abundancia por el ingreso de un mayor número de hembras infectadas. Desde el punto de vista de control este comportamiento permite diseñar estrategias que disminuyan la transmisión del parásito en el interior del domicilio.