Martes, 22 de julio de 2014
PCR-RFLP

Autor: Olivares-Paz,Alberto

Las lapas, clasificadas en el género Fissurella, se explotan desde tiempos prehistóricos en la costa chilena. Las diversas especies de lapas presentan diferencias en la consistencia o dureza del músculo y en cualidades organolépticas, por ello son distintamente valoradas por los consumidores. La ausencia o desconocimiento de los caracteres morfológicos diagnósticos, en algunas presentaciones del recurso, fraudes en el etiquetado o designación y la sobreexplotación de este recurso, demanda una metodología de identificación de cada especie. Este método garantizaría el correcto etiquetado de los productos comerciales y sería de utilidad en la gestión pesquera. Así, se diseñó un protocolo de PCR-RFLP que permite la identificación de diferentes especies de Fissurella, teniendo en cuenta incongruencias entre la taxonomía actual del género y los datos genéticos. La digestión de productos de PCR, con dos enzimas de restricción específicas (HpyCH4 V y Nla III), genera patrones específicos de restricción, los cuales permitirán identificar con precisión las diversas especies en cualquier fase de su comercialización y de su ciclo biológico

Autor: Montealegre Ortiz,María Camila

El propósito de este estudio fue investigar la presencia de Helicobacter pylori, realizar la caracterización del polimorfismo -31 del gen de la interleucina 1-β humana y establecer si existe asociación entre la presentación de alguno de los genotipos y la severidad de las manifestaciones clínicas en una población colombiana. Se analizaron biopsias gástricas provenientes de 71 pacientes, mediante histopatología y métodos moleculares (PCR y PCR-RFLP). Los resultados mostraron que el 97,2% de los pacientes presentaba alteraciones de la mucosa gástrica. La presencia de H. pylori se demostró en 44 pacientes y la frecuencia de los genotipos de IL-1B: TT, CT y CC fue de 12,7%, 60,6% y 26,8% respectivamente. No se encontró asociación entre los genotipos de la región polimórfica -31 del gen IL-1B y el grado de alteración de la mucosa gástrica en la población estudiada.

Autor: Quintero Vega,Militza

Objetivo: Estandarizar una técnica de PCR-RFLP para la detección y tipificación de VPH en mujeres con diagnóstico clínico previo de infección por VPH. Método: Estudio descriptivo de corte transversal donde se procesaron 189 muestras del área genital de mujeres que acudieron para extracción de ADN, diagnóstico y tipificación por técnicas moleculares: PCR-RFLP. Ambiente: Facultad de Ciencias, Laboratorio de Biología y Medicina Experimental LABIOMEX, Universidad de Los Andes. Mérida, Estado Mérida, Venezuela. Resultados: La PCR-RFLP permitió detectar el virus y su identificación. El 16,8 % de las muestras presentó VPH de alto riesgo tipos 16, 31, 33, 35, 56, 59 y 68; el 6,8 % presentó VPH de riesgo intermedio tipos 51, 53, 58, 61 y 83; y el 18 % los tipos de bajo riesgo 6, 32, 53, 54, y 81. Conclusiones: La técnica PCR-RFLP estandarizada fue adecuada para el diagnóstico y la tipificación de VPH en muestras del área genital. El 51,9 % del total de las muestras resultaron positivas para VPH, siendo VPH 16 el subtipo de alto riesgo más común (20,0 %), y VPH 6 el de bajo riesgo más frecuente (23,8 %).

Autor: Bouhadida, Mariem

Chloroplast DNA (cpDNA) in 84 Prunus L. accessions (interspecific hybrids and Prunus species) were analyzed to confirm the maternal origin of the interspecific hybrids of Prunus and to establish genetic relationships among Prunus species. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method, which included amplification of cpDNA regions with three universal primer pairs (K1K2, HK, DT) and subsequent digestion with three restriction enzymes (AluI, HinfI, TaqI), revealed 33 haplotypes for the 84 accessions studied. Fourteen from these cpDNA haplotypes were shared by two or more accessions, and 19 were unique. Accessions sharing the same haplotype have maternal relationships among them, which allowed identity confirmation of maternal progenitors of Prunus interspecific hybrids in these cases. Unweighted pair group method average (UPGMA) and minimum-length spanning tree (MST) analyses were performed based on shared common fragments and the number of mutational differences among the 33 haplotypes, respectively. The cpDNA polymorphisms detected made possible the analysis of genetic relationships among the studied Prunus accessions. Most of the recovered relationships are in agreement with current taxonomic hypotheses and artificial crosses.

Autor: Torres-Vázquez,José Antonio

With the objective of estimating allele frequencies, and testing for population divergence for the CSN1S1 locus, genotypes of animals from five goat populations; Saanen (n = 97), Alpine (n = 81) Toggenburg (n = 92), local goats with external appearance similar to the Murciana-Granadina breed from Central Mexico (n = 26) and heterogeneous local animals denominated Mosaico Lagunero (n = 30), from Northern Mexico, were identified using PCR and Xmn1 PCR-RFLP methodology. For Saanen, Alpine and Toggenburg, the sum of E and F alleles had the largest frequencies (from 0.468 to 0.789), while for the groups local Murciana-Granadina and Mosaico Lagunero the sum of the most frequent allelic groups (A* and B*), were 0.385 and 0.533 respectively. Both local Murciana-Granadina and Mosaico Lagunero populations showed heterozygote excess (P < 0.08). The percentage of the total genetic variation (F ST) explained by population differences was 5.16. There was genetic differentiation for most pair comparisons between populations (P < 0.05), excepting for Alpine versus Toggenburg, and Toggenburg versus Mosaico Lagunero (P > 0.05). For Saanen and Alpine the frequencies of alleles E and F were similar to the same breeds previously analyzed in Europe. Therefore there are opportunities of increasing the frequency of the strong alleles for protein content Gene Assisted Selection (GAS) in these two breeds. For Toggenburg the most frequent allelic groups were F (0.32) and B* (0.21). Results indicate differentiation between most populations for this locus. Moreover, heterozygote excess in local populations indicated breed admixture.

Autor: Padilla,C

Reportamos la aplicación de las técnicas moleculares PCR-RFLP para la confirmación de infecciones por Bartonella bacilliformis. El método de PCR-RFLP se basa en la amplificación in vitro de un fragmento de 380 pb correspondiente al gen citrato sintetasa a partir de sangre y cultivos in vitro. El análisis del producto de amplificación por cortes con las enzimas restricción Hinfl y Taql permite caracterizar molecularmente que el brote ocurrido en Urubamba, Cuzco fue producido por Bartonella bacilliformis. Este método es aplicado directamente a sangre y a cultivos.

Autor: Neira O,Patricia

Se denomina Hidatidosis a la zoonosis parasitaria que causa la infección de herbívoros o del hombre con el estado larval (hidátide) de parásitos del género Echinococcus. Objetivo: Revisión del tema y presentación del primer caso en Chile estudiado mediante técnicas de biología molecular. Caso Clínico: Preescolar de 3 años 9 meses procedente de Punta Arenas portadora de una hidatidosis múltiple de 6 quistes (4 pulmonares y 2 hepáticos), trasladada a la V Región para su tratamiento. Se realizó 3 cirugías y tratamiento médico asociado (Albendazol en dosis de 15 mg/kg/día vía oral) durante 73 días. Las hidátides extraídas fueron medidas, se efectuó estudio de fertilidad y vitalidad e identificación de cepa de Echinococcus granulosus mediante técnicas de biología molecular. La paciente mostró notable mejoría clínica e imagenológica, y mantuvo serología positiva. El tratamiento fue bien tolerado no presentando reacciones adversas. El tamaño de las hidátides fluctuó entre 6 y 11 cm de diámetro, todas fueron fértiles y vitales en diferente porcentaje y en todas se identificó cepa oveja de E. granulosus. De regreso en Punta Arenas, a los 4 meses se le detecta una nueva hidátide hepática que fue extirpada. El complejo manejo de este caso resultó exitoso

Autor: Neira O,Patricia

Se denomina Hidatidosis a la zoonosis parasitaria que causa la infección de herbívoros o del hombre con el estado larval (hidátide) de parásitos del género Echinococcus. Objetivo: Revisión del tema y presentación del primer caso en Chile estudiado mediante técnicas de biología molecular. Caso Clínico: Preescolar de 3 años 9 meses procedente de Punta Arenas portadora de una hidatidosis múltiple de 6 quistes (4 pulmonares y 2 hepáticos), trasladada a la V Región para su tratamiento. Se realizó 3 cirugías y tratamiento médico asociado (Albendazol en dosis de 15 mg/kg/día vía oral) durante 73 días. Las hidátides extraídas fueron medidas, se efectuó estudio de fertilidad y vitalidad e identificación de cepa de Echinococcus granulosus mediante técnicas de biología molecular. La paciente mostró notable mejoría clínica e imagenológica, y mantuvo serología positiva. El tratamiento fue bien tolerado no presentando reacciones adversas. El tamaño de las hidátides fluctuó entre 6 y 11 cm de diámetro, todas fueron fértiles y vitales en diferente porcentaje y en todas se identificó cepa oveja de E. granulosus. De regreso en Punta Arenas, a los 4 meses se le detecta una nueva hidátide hepática que fue extirpada. El complejo manejo de este caso resultó exitoso

Autor: Carvalho,C.M.

In the present study, three different methods were used to identify yeast isolated from Trás-os-Montes, Portuguese honey. A total of 24 isolates were identified using a partial sequence of the 26S rRNA gene (rDNA), restriction patterns generated from the region spanning the internal transcribed spacers (ITS1 and ITS2) of the 5.8S rRNA gene and the API 20C AUX kit. Nine different yeast species were identified representing six different genera. Among the isolated honey samples, Rhodotorula mucilaginosa, Candida magnoliae and Zygosaccharomyces mellis were the predominant species. Partial sequence of the 26S rDNA yielded the best results in terms of correct identification, followed by-5.8S-ITS analysis. The commercial identification kit API 20C AUX was able to correctly identify only 58% of the isolates. Two new 5.8S-ITS profiles were described, corresponding to Trichosporon mucoides and Candida sorbosivorans.